试剂:

β-TG和PF₄ELISA法药盒(上海第二医科大学)。

(1)本药盒的组成：板洗涤液10ml。样品缓冲液5ml，基质稀释液2ml，标准抗原0.1ml，酶标抗体0.1ml，OPD发色基质16mg(避光)，30%H₂O₂和3mol/L H₂SO₄自备，96孔ELISA包被板1块，使用说明书1份。

(2)测定前准备：

①板洗涤液：将10ml原液倒入另外瓶中，加去离子水90ml，使总体积为100ml为应用液(EL_－1)。

②样品缓冲液：将5ml原液倒入另外瓶中，加去离子水50ml，使总体积为55ml为应用液(EL_－2)。

③标准抗原：取标准抗原1支，加样品缓冲应用液(EL_－2)1ml，然后均分为2份(0.5ml/份)，取其中1份置于4℃冰箱中待用，另1份现用，用作第1管(200ng/ml)；此外，再取小塑料管6支，编号。各管依次写上100，50，25，12.5，6.25，3.125，先在每管各加样品缓冲液(EL_－2)250ml，然后从第1管(即200ng/ml)中吸出250μl注入第2管中(即100ng/ml)，依次对倍稀释，即成7个减半浓度的标准抗原稀释液。

④基质稀释液：将2ml原液倒入另一瓶中。加去离子水18ml，使总体积为20ml应用液(EL_－3)。

⑤酶标抗体：取1支，加样品缓冲液(EL_－2)10.5ml，使成应用液(需用前新鲜配制)。

⑥发色基质：将基质稀释应用液(EL_－3)20ml倒入小烧杯中，将16mg OPD发色基质投入，溶解混匀(可在36℃水浴中温育溶解)，临用时加30%H₂O₂20μl(其含量为0.8g/L)。

⑦3mol/L H₂SO₄：6ml用作终止反应用。

(3)采血和待测血浆稀释法：①采血：同放射免疫法测定；②待测血浆稀释法备标记“B”，“P”2支塑料管，在“B”管中先注入样品缓冲液(EL-2)300μl。而在“P”管中注入400μl；吸待测血浆样品100μl注入“P”管中混匀，即为待测样品稀释液，用作PF₄测定；然后从“P”管中吸100μl注入“B”管中，混匀，作为β-TG测定用。

(4)酶标分析仪。

正常值:

血浆β-TG为16.4±9.8ng/ml；PF₄为3.2±2.3ng/ml。

附注:

(1)吸取原液必须吸净，用应用液反复洗几次。

(2)加样时均需混合后进行，发色基质稀释液及酶标抗体都要在临用前新鲜配制。