操作方法:
(1)尿样收集:以5ml浓盐酸作为防腐剂,收集24h尿样本,充分混合后取2%尿液进行测定。
(2)水解:将尿样置于100ml三角瓶中,以3mol/L硫酸调pH至1.5~2.0(用精密pH试纸)。瓶口覆以倒置的小漏斗,在沸水浴中加热20min,然后置流水中冷却。
(3)吸附与洗脱:取3g活性氧化铝加入已水解的尿样中,以140g/L碳酸钠溶液慢慢滴入,并不断搅动,调节尿样的pH至8.2~8.4,立即将瓶置于振荡器上进行振荡吸附5min(275r/min),静置数分钟后倾去上清液,然后将瓶内氧化铝混悬液倾入柱层析管中(管底填有玻璃丝或具有砂心,管径10mm)。滤干后,以约10ml 0.2mol/L醋酸钠溶液清洗一次,再以重蒸馏水洗二次,每次约5ml,滤干后加入0.2mol/L醋酸溶液进行洗脱,用带塞刻度筒收集洗脱液50ml。
(4)正丁醇处理:以20ml正丁醇加入上述洗脱液中,倒转振摇约2min,静置,待溶液澄清以后,仔细将上述正丁醇吸出弃掉,即得澄清洗脱液。
(5)荧光产物的生成:取25ml三角烧瓶3只,按表1操作。
(6)荧光测定:以硫酸奎宁溶液校准荧光计至固定读数。用405nm为激发波长,515nm为发射波长,读取各瓶荧光数值。
离心5~10min,进行荧光测定。