操作方法:
放射性同位素法、胞浆乳酸脱氢酶释放法、流式细胞术
(1)效靶细胞作用:将分离好的淋巴细胞悬液(效应细胞)和标记的K562细胞(靶细胞)按100∶1的比例加入平底塑料试管中,按表1操作,同时设自然释放管(作为对照管),每个标本作了3个复管,最后用培养液使每管增至1ml,1500r/min离心,促进效靶细胞结合,置37℃、5% CO2孵箱内孵育18h。
(2)酶促反应:取出孵育试管,弃去各管上清液,剩下的细胞加一定浓度(2.2g/L)胰蛋白酶和DNA酶各0.1m1,混匀后37℃水浴30min,促使被攻击的靶细胞释放125IUdR,随后各管立即加入0.8ml Hank液终止酶促反应。混匀后1500r/min离心2min。
(3)测放射强度和计算:用γ型计数器分别测各管(上清和细胞管)cpm值,按下式计算;