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  • -分类名称
    一级分类:免疫学检查;二级分类:细胞免疫测定
  • -英文名称
    natural killer,NK
  • -别名
  • -概述
    概述:
    自然杀伤细胞(natural killer,NK)介导天然免疫应答,无抗原特异性,它不依赖抗体和补体即能直接杀伤多种肿瘤细胞,特别是造血系统肿瘤细胞以及受病毒感染的细胞等。
  • +原理
    原理:
    5-125碘-2'-脱氧尿嘧啶核苷(125IUdR)分子上的碘原子与胸腺嘧啶核苷上的甲基在空间构型上类似,作为DNA合成的前体物,125IUdR较特异的取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用于标记快速分裂的瘤细胞。当标记的肿瘤靶细胞被NK细胞攻击死亡后,靶细胞内的125IUdR可释放入培养液中,此释放的同位素几乎不再被活细胞利用。经用γ闪烁计数器测定cpm值,算出释放率,以其释放的百分率表示NK细胞的活性。
  • +试剂
    试剂:
    (1)淋巴细胞分层液、K562细胞株、5-FUdR和125IUdR、胰蛋白酶和DNA酶。
    (2)效应细胞 静脉血单个核细胞分离提取同K细胞测定方法,用RPMI 1640培养液洗涤2次,最后用该液配成1×107个/ml细胞悬液。
    (3)标记靶细胞 用慢性骨髓性白血病母细胞K562株作为靶细胞(此细胞可在液氮中长期贮存)。取一定量的靶细胞加入一定量的5-FUdR和125IU-dR,混匀置37℃培育2h,然后用培养液洗3次,配成1×105个/ml,检测细胞标记率,要求2cpm/每个细胞。
  • +操作方法
    操作方法:
    放射性同位素法、胞浆乳酸脱氢酶释放法、流式细胞术
    (1)效靶细胞作用:将分离好的淋巴细胞悬液(效应细胞)和标记的K562细胞(靶细胞)按100∶1的比例加入平底塑料试管中,按表1操作,同时设自然释放管(作为对照管),每个标本作了3个复管,最后用培养液使每管增至1ml,1500r/min离心,促进效靶细胞结合,置37℃、5% CO2孵箱内孵育18h。
    (2)酶促反应:取出孵育试管,弃去各管上清液,剩下的细胞加一定浓度(2.2g/L)胰蛋白酶和DNA酶各0.1m1,混匀后37℃水浴30min,促使被攻击的靶细胞释放125IUdR,随后各管立即加入0.8ml Hank液终止酶促反应。混匀后1500r/min离心2min。
    (3)测放射强度和计算:用γ型计数器分别测各管(上清和细胞管)cpm值,按下式计算;
  • +正常值
    正常值:
    胞浆乳酸脱氢酶释放法:27.5%~52.5%;51Cr释放法自然杀伤率:47.6%~76.8%;FACS : 8.1%~25.6%。
  • +临床意义
    临床意义:
    ①NK细胞活性升高:常见于病毒感染早期、Down综合征、接受器官移植者、宿主抗移植反应强烈者,常伴有NK活性增高;②NK细胞活性降低:常见于恶性肿瘤、原发性淋巴细胞联合免疫缺陷病(SCID)、AIDS和免疫抑制剂使用者等。
  • +附注
    附注:
    (1)要求效/靶细胞比为100∶1,若比>100∶1,自然杀伤率不呈对数增加。且标本用量亦大。
    (2)标记靶细胞放置时间不宜过久。因随时间延长死细胞增加,自然释放率欠准确。
    (3)标记的125IUdR浓度要合适,要求125IUdR的放射性浓度为1.11×107Bq/ml,如浓度过低,标记率<0.1cpm细胞,检测结果受影响。
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