原理:

(1)碳氧血红蛋白定性试验：一氧化碳与血红蛋白结合后，形成樱桃红色的碳氧血红蛋白，它对碱抵抗力较正常血红蛋白为强。

(2)碳氧血红蛋白双波长定量测定：用连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)将血中的HbO2、MetHb还原成Hb，使血中多组分的血红蛋白转化为只有Hb和COHb两个组分，前者的最大吸收波长为320nm，后者为432nm，在分光光度计上分别测出被检血样在420nm和432nm两个波长处的吸光度，代人依比尔定律建立的联立方程式，求出血样COHb含量。

操作方法:

(1)碳氧血红蛋白定性试验：

①取试管2支，各加蒸馏水3～5ml，一管加患者血液3滴，另一管加正常人对照血3滴，混匀。此时。如患者血中有一氧化碳，则血液呈樱桃红色。

②每管各加50g/L NaOH 1滴，轻轻混合，正常对照管呈绿褐色，如患者血液中有碳氧血红蛋白，则溶血液仍呈樱桃红色，为阳性；如与正常对照色泽一致为阴性。

(2)碳氧血红蛋白双波长定量测定：

①F值制定：制备Hb溶液(不含COHb)和饱和COHb溶液(COHb含量为100%)。取不吸烟并于近期无CO接触史者的全血50μl，加入6.0ml试剂Ⅱ中，放置5min，使充分溶血。另取两只25.0ml容量瓶，每瓶准确加入上述溶血液2.0ml，在通风橱内，其中一瓶通入空气5min；另一瓶通入煤气(CO)1min，然后通入氮气2min。每瓶加入Na₂S₂O₄250mg，加试剂Ⅰ至刻度，加塞颠倒3～5次，使其溶解。10min后，用420nm和432nm两波长比色，以试剂Ⅱ调零，记录A_Hb420、A_Hb432、A_COHb420、A_COHb432。根据比尔定律：A＝a·b·c，因为Hb和COHb均来自同一份样，血红蛋白含铁摩尔浓度(c)相同，比色条件相同(b)，故：

应用上法，测得F值分别为F₁＝1.3041；F₂＝0.5742；F₃＝1.8627。

②样品测定：取小试管一支，加试剂Ⅱ1.2ml，加入常规采取的指血10μl，混匀5min使之溶血，另取带塞试管一支，取上述溶血液0.2ml与2.3ml试剂Ⅰ相混合，加Na₂S₂O₄25mg，加塞颠倒使其溶解，10min后用试剂Ⅱ调零，在窄带宽型分光光度计上用420nm和432nm两个波长比色，记录A₄₂₀和A₄₃₂。

临床意义:

中毒症状取决于血中COHb的浓度:>2%时即可引起神经系统反应;达5%时,冠状动脉血流量显著增加;达10%时,冠状动脉血流量可增加25%,这是一种代偿功能。但冠心病患者则没有这种代偿能力,因而导致心肌缺氧、损伤。当血中COHb为2.5%时就可缩短心绞痛患者的发作时间。同时血中COHb浓度也是大气污染或室内空气污染生物材料监测的重要指标。

急性一氧化碳中毒后检测越早越易阳性。一般情况下,吸氧后检测易致阴性结果;急性一氧化碳中毒存活患者脱离中毒环境>8h者,COHb浓度一般<10%。