试剂:
(1)抗原制备:
①提取致敏物:将钩端螺旋体培养物(如黄疸出血热型)浓缩至菌数为100亿/ml。加苯酚至最终浓度为0.3%,使溶菌,取0.3%苯酚菌液1ml加无水乙醇9ml,置40℃冰箱24h,使抗原沉淀,然后2000r/min离心10min,取沉淀加硼酸缓冲液(pH8.2)至原量,即成致敏物。
②胶乳处理:取10%胶乳液3ml加1%胰蛋白酶液(硼酸缓冲液配制)1ml及硼酸缓冲液6ml,56℃水浴24h,取出用4000r/min离心45min,弃上清液,沉淀用硼酸缓冲液,稀释至5ml。
③致敏法:取致敏物10ml徐徐加入处理胶乳10ml,边加边摇,放入56℃水浴中24~48h(每天摇2~3次)。取出放室温3~5天测定后应用。
④抗原测定:取免疫血清、阳性患者血清、阴性血清及生理盐水各1滴,分别滴于玻片上,各加致敏胶乳抗原1滴,混匀,观察结果。如免疫血清及阳性血清均发生明显凝集,阴性血清及生理盐水仍为均匀乳状者,即可应用。
(2)钩端螺旋体免疫血清:由生物制品所供应,效价1∶6000为宜。