原理:

(1)热不稳定试验：不稳定Hb在体外经加热后加速变性沉淀。由加温后血红蛋白溶液浓度的减低可以计算出被沉淀的不稳定Hb含量。

(2)异丙醇试验：异丙醇是一种非极性化合物，可使血红蛋白内部非极性的氢键结合减弱，从而血红蛋白的稳定性减低。正常血红蛋白加入异丙醇孵育于37℃ 40min以后才出现沉淀，而不稳定血红蛋白孵育5min即出现沉淀，故可用以鉴定不稳定血红蛋白。

(3)红细胞变性珠蛋白小体检查：不稳定血红蛋白与氧化还原染料煌焦油蓝共同孵育后，可形成变性的珠蛋白小体(Heinz小体)贴于红细胞膜附近，又称为红细胞包涵体。

操作方法:

(1)热不稳定试验：

①取新鲜制备的溶血液0.5ml，加入0.1mol/LTris缓冲液2.5ml中，混匀后，取1.5ml于另1试管中。

②将两试管均加塞，其一放于冰箱做对照，另一放于50℃水浴中，为测定管，计时。

③2h后同时取出两管，将加热管用自来水冲冷后，两管同时离心。3000r/min，10min。

④取试管3支分别标明空白、对照、测定。各加入5ml氰化高铁血红蛋白稀释液。然后于空白管加入Tris缓冲液0.1ml，对照，测定管分别加入离心

后的相应溶血液0.1ml，室温放置20min。

⑤以空白调零，分别在540nm测两管吸光。

⑥计算：

沉淀血红蛋白%＝

(2)异丙醇试验：

①将放于37℃水浴中预热5min的装有17%异丙醇溶液1ml的小试管取出，立即加入0.1ml血红蛋白液，混匀后再放入水浴中，立即计时，于5、10、20、30、40min分别观察沉淀产生。

②结果判断：

(＋＋＋＋)5min出现沉淀，20min出现大块沉淀。

(＋＋＋) 5min出现混浊。到40min出现粗颗粒。

(＋＋) 10min出现混浊，到40min出现细颗粒。

(＋) 20min出现混浊，40min出现极细颗粒。

(－) 温育40min后仍透明或稍混浊而无颗粒。

(3)红细胞变性珠蛋白小体检查：

①取煌焦油蓝试剂0.5ml置小试管内，加新鲜血3～4滴，混匀，加塞，置37℃温箱中孵育。

②在10min，1h，24h各取出一滴制成薄血片，立即风干，油镜下观察。

③在油镜下计数500个红细胞，记录出现蓝色颗粒状折光小体的红细胞数目，求出阳性百分率。

临床意义:

升高（或阳性）：不稳定血红蛋白病。