操作方法:
(1)直接抗人球蛋白试验：
①在标记好的10或12×60mm试管内加1滴5%受检者红细胞生理盐水悬液。再用生理盐水洗涤3～4次。末次洗涤后，将上清液全部倾出，尽量吸干，立即加入1～2滴最适广谱抗人球蛋白血清，混匀。
②以1000r/min离心15s，借助光镜检查。从试管底部松动红细胞，轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复轻轻地倾斜试管，直到呈现均匀的细胞或者凝集物为止。
③若为阴性，再加1滴5%IgG致敏的红细胞，以1000r/min离心15s。如凝集，表明原先的阴性结果是正确的。如不凝集，则不是先前的洗涤不充分，就是抗人球蛋白试剂失效之故。这是一个很重要的对照。
④直接抗人球蛋白试验判断为阳性者，应继续用单特异性的抗人球蛋白血清试验，以便确定红细胞是被IgG致敏，还是受补体致敏。单价特异性抗人球蛋白血清的使用方法与广谱抗人球蛋白血清相同。
(2)间接抗人球蛋白试验：
①在标记好的10(12)×70mm试管内加3滴患者血清，再加5%红细胞悬液1滴，另外将2滴不完全抗D血清加入阳性对照管中2滴AB型血清加入阴性对照中，分别加入5%阳性红细胞悬液1滴，混合后，放37℃水浴1h。
②用生理盐水洗涤致敏后的红细胞3次，以3000r/min离心45s，倾去上清液，尽量吸干，随即加入1～2滴抗人球蛋白血清，混匀。
③以1000r/min离心15s，借助光镜检在，从试管底部松动红细胞，轻轻地摇动，直到松动所有的细胞，然后反复轻轻倾斜试管，直到呈现均匀的细胞或凝集物为止。阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集。
④受检管若为阴性，加1滴2%～5%IgG致敏的红细胞悬液，以1000r/min离心15s后看结果，如凝集则结果是正确的，否则是不正确的。
⑤间接抗人球蛋白试验阳性者，继续用单价特异性抗人球蛋白血清检测，方法与用广谱抗球蛋白血清一样。
