原理:
根据朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律当光线通过抗原抗体反应系统时,由于溶液中存在抗原抗体复合物,光线被吸收。吸收的量和复合物的量成正比(图1)。
E:吸光度变化率;
Io:入射光;
I:透光度;
C:溶液的浓度;
K:cd或常数;
c:分子吸光系数;
d:光路长。
测定方法有沉淀反应免疫比浊法和乳胶颗粒被动凝集免疫比浊法。
(1)沉淀反应免疫比浊法:当抗体过剩时,抗原、抗体最适比值浓度范围大致呈直线。应用紫外波长(340nm)可测定抗原抗体复合物浊度。大多数光电比色计,分光光度计及自动生化分析仪均可用于比浊。
(2)乳胶颗粒被动凝集免疫比浊法:将抗体致敏在乳胶颗粒上,加上抗原时,致敏的乳胶颗粒与抗原相结合,形成大小不等的凝集块。凝集颗粒小时,光可通过;凝集颗粒大时,光散乱,透过光减少。利用此原理,可采用两种方式比浊。
①白色光乳胶颗粒比浊法:乳胶颗粒直径在0.1~0.8μm范围时,粒径大,吸光度增加,用500nm左右波长;0.1μm粒径可用585nm波长进行测定。
②近红外光乳胶颗粒比浊法:与白色光比浊原理相同,粒径0.2μm乳胶颗粒,可用940nm近红外光测定。