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  • -分类名称
    一级分类:体液和排泄物检查;二级分类:尿液检查
  • -英文名称
    urinary C peptide
  • -别名
  • -概述
    概述:
    同CP不受外源性胰岛素及胰岛素抗体干扰,故判断B细胞功能最真实、最全面、最敏感的指标之一。
  • +原理
    原理:
    放射性标记物125I-CP和标本(或标准品)中的C肽与有限的C肽抗体竞争性结合,达到平衡后,加入分离剂,测定沉淀物中放射活性,与标本中C肽含量成负相关。
  • +试剂
    试剂:
    (1)0标准品:含硫柳汞的BSA硼酸盐缓冲液(冻干)。用20ml蒸馏水或去离子水溶解,静置15~20min直至完全溶解。用前充分混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
    (2)人胰岛素C-肽标准品:人胰岛素C-肽标准品溶于含稳定剂的BSA-硼酸盐缓冲液中(冻干)浓度范围0.6~20ng/ml,用方法B,还需一低浓度标准品0.15ng/ml,每瓶标准品用1ml蒸馏水或去离子水溶解,静置15~20min直至完全溶解,用前充分混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
    (3)兔抗胰岛素C-肽血清:兔抗胰岛素C-肽血清溶于含硫柳汞的BSA-硼酸盐缓冲液中(冻干),已加绿色染料,用14ml蒸馏水或去离子水溶解,静置室温15~20min直至完全溶解,用前充分混匀。溶解后的试剂放-15℃以下保存。
    (4)125I胰岛素C-肽:125I标记的人胰岛素C-肽溶于含硫柳汞的BSA-硼酸盐-EDTA缓冲液中(冻干)。用14ml蒸馏水或去离子水溶解,静置15~20min,直至完全溶解,用前充分混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
    (5)羊抗兔抗体与沉淀混合液(GAR-PPT):羊抗兔抗血清与PEG混合溶于含防腐剂的BSA-硼酸盐缓冲液中(冻干)。用35ml蒸馏水或去离子水溶解。充分混匀直至悬浊液混合均一,然后置室温至少30min并不断混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
    (6)质控血清(质控-Ⅰ、质控-Ⅱ):含NaN3和其它稳定剂(冻干),用1.0ml蒸馏水或去离子水溶解、混匀,置室温15~20min,直至完全溶解,用前充分混匀,将质控血清当作未知标本进行测定,每批的具体数值可从各试剂的质控图上找到。溶解后的试剂放-15℃以下保存。
    (7)PEG(25%)。
    2~8℃以下保存。
  • +操作方法
    操作方法:
    (1)方法1:
    ①溶解冻干的试剂或将冻存的试剂彻底复融,操作温度不得高于25℃,用前轻轻混匀。
    ②将试管编号,均做双管。
    ③加入试剂:
    A.总计数管:放置一旁至步骤④。
    B.非特异性结合管(NSB):100μl 0标准品。
    C.0标准品:100μl 0标准品+200μl兔抗胰岛素C-肽血清。
    D.胰岛素C-肽标准品(A-E):100μl标准品+200μl兔抗胰岛素C-肽血清。
    E.质控和待测标本:100μl血清或尿标本+200μl兔抗胰岛素C-肽血清。
    ④每管加200μl125I胰岛素C-肽。
    ⑤轻轻混匀,试管中不能产生气泡,2~8℃孵育16~24h。
    ⑥沉淀剂用前充分混匀,除总计数管外每管加500μl沉淀剂。
    ⑦轻轻混匀,试管中不得有气泡,20~25℃孵育15~20min。
    ⑧在20~25℃以760×g离心20min。
    ⑨倾出管内上清液体(总计数管除外),用吸水纸吸干。
    ⑩用γ计数器计数沉淀和总计数管。
    (2)方法2:
    ①溶解冻干的试剂或将冻存的试剂彻底复融。操作温度不得高于25℃,用前轻轻混匀。
    ②将试管编号,均做双管。
    ③加入试剂。
    A.总计数管:放置一旁至步骤⑤。
    B.非特异性结合管(NSB):100μl 0标准品。
    C.0标准品:100μl 0标准品+200μl兔抗胰岛素C-肽血清。
    D.胰岛素C-肽标准品(A-E):100μl标准品+200μl兔抗胰岛素C-肽血清。
    E.质控和待测标本:100μl血清或尿液标本+200μl兔抗胰岛素C-肽血清。
    ④2~8℃孵育16~24h。
    ⑤每管加200μl125I胰岛素C-肽。
    ⑥轻轻混匀,不得有气泡,2~8℃孵育16~24h。
    ⑦沉淀剂用前充分混匀,除总计数管外,每管加500ml。
    ⑧轻轻混匀,不得有气泡,20~25℃孵育15~25min。
    ⑨在20~25℃以760×g离心20min。
    ⑩倾出管内上清液(总计数管除外),用吸水纸吸干。
    ⑪用γ计数器计数沉淀和总计数管。
  • +正常值
    正常值:
    45~117μg/24h。
  • +临床意义
    临床意义:
    (1)升高:胰岛细胞瘤、胰岛素自身免疫综合征。
    (2)降低:1型糖尿病。
  • +附注
    附注:
    留尿送检时,并需注明是否用胰岛素治疗。
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