试剂:
(1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB):
①MTB试剂:取去离子水20ml,加浓盐酸1.2ml,再加8-羟基喹啉1.45g溶解。另取去离子水500ml,加甲基百里香酚蓝络合剂0.114g使溶,再加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1.5g溶解,混合两液,加16.75g/L乙二胺四乙酸二钠水溶液2.2~2.4ml混匀,加去离子水至1L。
②显色基础液:取去离子水700ml加无水亚硫酸钠24g溶解,加单乙醇胺200ml混匀,用去离子水稀释至1L。
③钙标准液(2.5mmol/L):精称恒重的碳酸钙(CaCO3,AR)0.25g,加稀盐酸(1份浓盐酸加9份去离子水)7ml溶解后,加去离子水900ml,然后用500g/L醋酸铵溶液调pH至7.0,移入1L容量瓶中,再用去离子水稀释至刻度,混匀。
(2)邻甲酚酞络合酮直接比色法:
①邻甲酚酞络合酮显色剂:称取8-羟基喹啉0.5g,置烧杯中,加浓盐酸5ml,使其溶解并转入500ml容量瓶中,再加入邻甲酚酞络合酮25mg,待完全溶解后,加Triton X-1001ml,混匀,然后加去离子水至刻度。置聚乙烯瓶内保存。
②1mol/L AMP碱性缓冲液:称取2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)89.14g,加500ml去离子水溶解后移入1L容量瓶中,再用去离子水稀释至刻度,置聚乙烯瓶中室温保存。
③显色应用液:应用时根据标本的多少将上述两液等量混合。
④钙标准液(2.5mmol/L)见MTB法。
⑤5g/L EGTA溶液:称取乙二醇二乙醚二胺四乙酸盐(EGTA)0.5g于100ml去离子水中,此试剂用于测定混浊标本。
(3)乙二胺四乙酸二钠滴定法:
①0.2mol/L的氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠8g,用去离子水溶解并稀释至1L。
②钙红指示剂:称取钙羧酸钠[化学名2-羟基-1-(2-羟基-4-磺基-1-萘基偶氮)-3-萘甲酸钠]0.1g,溶于甲醇20ml中,置棕色瓶中保存。
③乙二胺四乙酸二钠溶液:称取ED-TA-Na20.1g,加去离子水50ml,加1mol/L氢氧化钠2ml,待完全溶解,加去离子水至100ml。
④钙标准液(2.5mmol/L):配法同MTB法。