试剂:

(1)pH7.4 0.02mol/L Tris-NaCl缓冲液(TBS)称取Tris 2.42g NaCl 8.75g，牛血清白蛋白(BSA)1.0g、NaN₃0.5g溶于双蒸水后，再加双蒸水至1000ml。用浓HCl调pH至7.4，再加Tween20和TritonX-100各0.1ml，混匀。

(2)银染色液：分别取20.0g/L明胶6ml，pH3.5柠檬酸缓冲液(柠檬酸5.1g，柠檬酸钠4.7g加蒸馏水至20ml)1ml，57.0g/L对苯二酚溶液3ml与25.0g/L硝酸银溶液0.2ml，于用前依次混匀。

(3)胶体金溶液：将氯金酸(HAuCl4)用抗坏血酸、鞣酸或柠檬酸钠等还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)。取10.0g/L氯金酸水溶液1ml加于双蒸水99ml中，煮沸后迅速加入2.45ml柠檬酸钠-鞣酸溶液(10.0g/L、柠檬酸钠2.0ml、10.0g/L鞣酸0.45ml)再煮5min，室温冷却后，补足双蒸水至1000ml，即成直径5nm的紫红色的胶体金溶液。

(4)金标记SPA(SPA-G)：胶体金标记SPA或抗体等可用于免疫转印技术与免疫组织化学定位。

①确定SPA最适用量：取10支试管各加入1ml胶体金溶液和0.1ml各稀释度的SPA(1.0g/L SPA系列稀释)混匀后放置5min。各管再加0.1ml 100.0g/L NaCl溶液，置室温2h后肉眼观察，使1ml胶体金保持稳定的紫红色不变的最小SPA量即为SPA最适用量(如80mg/L)。实际标记时SPA用量应再增加10%～20%。

②标记：取胶体金100ml调pH6.0，搅拌下加入SPA1.0mg，5min后加BSA使达10.0g/L浓度。装透析袋中埋入变色硅胶中浓缩，经SephadexG-200柱(1.2cm×30cm)层析，用TBS洗脱，收集清澈透明的深红色组分，加等量中性甘油混合后分装，4℃存贮。

正常值:

0001111000(符号代表；0为玫瑰红色与对照管相同、1为红带蓝色、2为淡紫色或紫色、3为蓝色、4为微蓝色、5为无色)。

附注:

(1)此法具有分辨力高，定位精确的优点。

(2)所用玻璃器皿应洁净，所用蒸馏水必须双蒸或三蒸。

(3)配制胶体金溶液时，调整各试剂的比例可获直径不同的金颗粒。

直径＞10nm的金粒子不易穿透组织，故作细胞内抗原定位时，以配制直径5nm的金溶胶为宜。

(4)硝酸银、对苯二酚溶液应避光保存并临用时现配。

(5)被检血清中有其他自身抗体，如抗平滑肌抗体，抗心肌抗体、抗线粒体抗体等其抗原片应根据专门试验的要求制备。