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-分类名称
一级分类:体液和排泄物检查;二级分类:脑脊液检查
-英文名称
apolipoprotein in cerebrospinal fluid
-别名
-概述
概述:
组成脂蛋白的特殊蛋白称为Apo。Apo是决定脂蛋白性质的主要蛋白成分。在不同的脂蛋白中，Apo的种类、含量和功能也不同。Apo的主要功能有：①构成脂蛋白，使血浆脂质成为可溶性。②激活或抑制脂蛋白代谢有关的酶。③识别脂蛋白受体，与特异性脂蛋白受体结合。④结合和转运脂质，稳定脂蛋白结构等。
+原理
原理:
用聚苯乙烯微量反应板为固相载体，以apo(a)单克隆抗体(McAb)包被，加入待测标本，使其中的apo(a)与固相化的McAb结合，洗涤除去未结合的标本中其他蛋白质，再加入酶标记的apo(a)McAb，与结合到固相抗体上的apo(a)作用，洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应，显色的程度决定于结合在固相载体的apo(a)量。
McAb应用杂交瘤技术制备，以超速离心结合层析法纯化的LP(a)为抗原。所制备的McAb应与apoB及纤溶酶原(PMG)无交叉反应。混合数株识别apo(a)上不同抗原位点的McAb，用于建立血清LP(a)双抗体夹心法。
+试剂
试剂:
(1)包被缓冲液：0.02mol/L碳酸盐缓冲液pH9.5；
(2)包被抗体与酶标抗体：用McAb混合液，以(NH4)2SO4沉淀法制备抗人apo(a)-IgG，部分作包被用，部分以过碘酸盐法交联辣根过氧化物酶(RZ≥3)得酶标抗体，－20℃保存可稳定数月；
(3)稀释/封闭液：pH7.4缓冲液含磷酸盐0.01mol/L及氯化钠0.15mol/L，临用前取适量缓冲液，加入适量小牛血清及吐温-20；
(4)底物溶液：0.1mol/L枸橼酸及0.2mol/L Na₂HPO₄缓冲液，pH5.0，临用前每100ml缓冲液中加入邻苯二胺0.1g及30%H₂O₂0.1ml；
(5)终止液：2mol/L H₂SO₄；
(6)洗涤液：0.15mol/L NaCl，每升含吐温-20 0.5ml；
(7)参考血清：目前尚无公认的定值血清，可暂用商品(如BM公司产品，1410962)。
+操作方法
操作方法:
(1)单向免疫扩散法。
(2)火箭免疫电泳法。
(3)ELISA法。
+正常值
正常值:
(1)单向免疫扩散法：未测出ApoB₁₀₀、C_Ⅱ，而ApoC_Ⅲ含量极微；ApoA₁为0.01±0.0054g/L，ApoE为0.0069±0.0016g/L与22.2%。
(2)火箭免疫电泳法：ApoA₁0.04±0.01g/L。
(3)ELISA法：ApoE 0.008±0.001g/L。。
+临床意义
临床意义:
脑脊液中载脂蛋白含量远低于血液水平，免疫组化试验证明大脑额叶的星形胶质细胞及某些神经元能合成ApoE，而CSF中的ApoA₁与ApoC_Ⅱ可能从血中渗入。但当患神经系统疾病时，可致血脑屏障功能受到损害。使其通透性增高，血液中ApoA₁可更多渗入CSF中，ApoA₁含量增加；因ApoB₁₀₀分子量大不能透过，故脑膜炎、脑血管病，脑囊虫患者ApoA₁、ApoE在CSF中的水平均升高。载脂蛋白的测定可为诊断某些神经系统病提供有价值的信息。
+附注
附注:
(1)LP(a)颗粒中apo(a)与apoB以二硫键相联结；apo(a)的氨基酸组成与PMG有高度同源性，故用LP(a)给动物免疫所得抗血清(多克隆抗体)中同时有抗apoB与PMG抗体，通常用亲和层析法纯化，不易获得纯apo(a)抗体。但用杂交瘤技术制备的McAb可以避免与apoB及PMG的交叉反应。
(2)为了避免孔间差异，减少误差，同一标本最好平行做2～3份，取平均值。
(3)应严格掌握稀释的精密度，由于血清LP(a)水平可小于10mg/L或高达1000mg/L以上，对过高过低的标本应调整稀释倍数后重新测定。
(4)包被抗体与酶标抗体不可反复冰冻融化，稀释/封闭液及底物液应新鲜配制。空白吸光度增高可能由于底物溶液陈旧或封闭不充分。
(5)本法批内CV＜5%，批间CV＜9%。实验误差来源有板间差、孔间差、稀释及加样误差、试剂质量及孵育时间等。

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