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  • -分类名称
    一级分类:免疫学检查;二级分类:细胞免疫测定
  • -英文名称
    serum complement C3 split product
  • -别名
  • -概述
    概述:
    C3主要是由巨噬细胞、单核细胞、淋巴组织、骨髓、腹膜和肝脏等合成的一种β球蛋白。C3在C3裂解酶的作用下进一步裂解,参与所有补体的激活。
  • +原理
    原理:
    将含有抗补体抗体的琼脂铺在玻璃板上,然后打孔,加抗原(补体)。在合适的温度、湿度环境中,经过一定时间扩散,抗原与混匀在琼脂中的抗体在比例合适处可形成清晰的沉淀环。沉淀环直径大小与抗原的浓度在一定范围内成正比。用标准抗原制成标准曲线,可查出被测抗原的含量。
  • +试剂
    试剂:
    (1)0.1mol/L pH8.6巴比妥缓冲生理盐水:巴比妥3.68g,巴比妥钠,20.6g,加蒸馏水至1000ml。临用时与生理盐水等量混合,调pH8.6,按1/2000加入NaN3防腐。
    (2)15.0g/L琼脂:称取优质琼脂粉15g,加入蒸馏水500ml水浴煮沸,使琼脂溶解。然后再加入预先温热的0.1mol/L pH8.6巴比妥缓冲生理盐水500ml,混匀后分装小瓶,4℃冰箱保存备用。
  • +操作方法
    操作方法:
    (1)稀释抗C3血清及制备含抗C3血清的琼脂板先按要求的稀释度计算出稀释液的用量,其中的半量采用缓冲液。抗C3血清用缓冲液稀释后放56℃水浴预温。然后再加等量的、已预温的15.0g/L琼脂,使抗血清的最终稀释度达到要求。按单向免疫扩散法常规浇制含抗C3血清的琼脂板,冷却凝固后打孔(孔径3mm),孔距1.5cm以上。
    (2)标准曲线绘制:将冷冻干燥的C3参考血清,按规定加入准确量的蒸馏水,充分混匀后,再用0.1g/L硫柳汞生理盐水稀释至500μg/ml,然后按表1作一系列稀释。
    一般用1∶25,1∶50,1∶75,1∶100四个稀释度抗C3血清制板后,用微量注射器在孔中分别加入上述不同浓度的C3参考血清(每孔中加10μl),经37℃ 48h保温后,测得沉淀环直径。以沉淀环直径为纵坐标,相应的C3含量的对数为横坐标,初步绘制标准曲线。一般以沉淀环直径在4~8mm所绘制的标准曲线较佳。
    (3)正式试验:先将受检血清用0.1g/L硫柳汞生理盐水稀释5倍,按序加入琼脂板相应孔中(每块板应同时作5个以上不同浓度的C3参考血清作对照)将琼脂板放湿盒内,置37℃ 48h后测量结果。所得C3参考血清沉淀环直径与原先绘制的标准曲线上相应值相比,最低浓度C3参考血清的沉淀环不应比原先大0.1mm,最高浓度不大于0.3mm,其他3个浓度不大于0.2mm,否则应重新测定。
  • +正常值
    正常值:
    0.0094g/L。
  • +临床意义
    临床意义:
    补体动态变化在临床上越来越受到重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均明显下降。大多数全身性红斑狼疮患者血清补体的降低和病情恶化有关。活动性全身性红斑狼疮患者血清中C2、C4、C2和C3降低,病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤和急性炎症时,C2、C3、C4均增加,总补体活性正常或升高。但晚期则降低。肿瘤患者补体量升高,特别是肝癌,C3升高最为明显,具有诊断意义。也有报道胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低,肾移植病人C3的水平不稳定,C3在排异反应开始时升高,然后下降到正常以下。
  • +附注
    附注:
    (1)浇琼脂板时注意避免产生气泡。
    (2)稀释血清、抗血清所使用的吸量管必须固定。稀释参考血清和患者血清皆用统一校正过的吸管,否则要用同一根吸管。其他器材也最好统一。
    (3)所用琼脂浓度一定要严格控制,分装后防止干燥,不要反复溶解。溶解时不要煮沸时间过长,以防水份蒸发。56℃温度要严格,太热会破坏血清,太冷易凝固。混合要迅速、充分。
    (4)加好血清后放的位置一定要保持水平,以防扩散圈变形。
    (5)受检者血清须新鲜。如条件不许可,可将血清冰冻保存或稀释后保存,数天之内影响不大,时间久后易使C3值增高。
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