操作方法:
(1)稀释抗C3血清及制备含抗C3血清的琼脂板先按要求的稀释度计算出稀释液的用量,其中的半量采用缓冲液。抗C3血清用缓冲液稀释后放56℃水浴预温。然后再加等量的、已预温的15.0g/L琼脂,使抗血清的最终稀释度达到要求。按单向免疫扩散法常规浇制含抗C3血清的琼脂板,冷却凝固后打孔(孔径3mm),孔距1.5cm以上。
(2)标准曲线绘制:将冷冻干燥的C3参考血清,按规定加入准确量的蒸馏水,充分混匀后,再用0.1g/L硫柳汞生理盐水稀释至500μg/ml,然后按表1作一系列稀释。
一般用1∶25,1∶50,1∶75,1∶100四个稀释度抗C3血清制板后,用微量注射器在孔中分别加入上述不同浓度的C3参考血清(每孔中加10μl),经37℃ 48h保温后,测得沉淀环直径。以沉淀环直径为纵坐标,相应的C3含量的对数为横坐标,初步绘制标准曲线。一般以沉淀环直径在4~8mm所绘制的标准曲线较佳。
(3)正式试验:先将受检血清用0.1g/L硫柳汞生理盐水稀释5倍,按序加入琼脂板相应孔中(每块板应同时作5个以上不同浓度的C3参考血清作对照)将琼脂板放湿盒内,置37℃ 48h后测量结果。所得C3参考血清沉淀环直径与原先绘制的标准曲线上相应值相比,最低浓度C3参考血清的沉淀环不应比原先大0.1mm,最高浓度不大于0.3mm,其他3个浓度不大于0.2mm,否则应重新测定。