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  • -分类名称
    一级分类:免疫学检查;二级分类:自身抗体测定
  • -英文名称
    anti distrand dna antibody
  • -别名
    anti-dsDNA
  • -概述
    概述:
    抗双链DNA抗体(抗ds DNA)是抗DNA抗体中的一种。其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗ds DNA主要出现于SLE患者的血清中,对SLE患者的组织器官损伤有致病作用。在SLE患者血循环中,大分子的DNA浓度显著高于正常人,DNA还可与多种器官的微血管结构包括肾小球基底膜上的硫酸乙酰肝素(heparansulfate)结合,抗dsDNA抗体可与这些循环中的和器官原位的DNA分子反应,形成抗原抗体复合物,激活炎症系统如补体活化途径,导致组织损伤。也有人认为,致病性抗DNA抗体在肾脏中的沉积并非只取决于抗DNA抗体与DNA的结合,而是通过与基底膜上硫酸乙酰肝素、层粘连蛋白(laminin)、心磷脂等非DNA抗原的交叉反应或静电引力作用固定于肾脏,诱导炎症反应。抗DNA自身抗体中有的有致病性,有的没有致病性。致病性的抗DNA抗体具有以下特性:亲和性高,能与补体结合,能结合dsDNA,带正电荷,多反应性,为IgG类。近年来的研究发现,抗DNA抗体能穿入活的淋巴细胞,干扰细胞功能,引起细胞凋亡,抗dsDNA抗体也能进入肾小球膜细胞,引起肾小球细胞增殖,促细胞融合和蛋白尿形成。这可能是致病性抗DNA抗体的另一特征。
  • +原理
    原理:
    目前,测定抗dsDNA的常用方法有4种,它们的原理分述如下:
    (1)绿蝇短膜虫(crithidia luciliae,CL)间接免疫荧光(IIF)或免疫酶染色(EIS)法:CL属于血鞭毛虫属,它有一个大的含纯净dsDNA的线粒体即动基体(kinetoplast),其抗原浓度较Hep-2细胞核或肝细胞核中抗原浓度高10倍,待测血清中的抗dsDNA抗体可与之结合(抗ssDNA不能)。在分布有一定浓度CL的抗原片上,IIF法是依次滴加稀释的待测血清,反应后洗片,滴加荧光素标记的抗人IgG,反应后洗片,片干后于荧光显微镜下观察。抗dsDNA阳性时,CL动基体处出现黄绿色荧光。EIS法原理与IIF法类似,仅以酶标记抗人IgG代替荧光素标记抗体,加酶底物呈色后于普通显微镜下观察,抗dsDNA阳性时,CL动基体被特异地染色。
    (2)放射免疫分析法(Farr试验):用放射性核素(如125Ⅰ)标记dsDNA,加入待测血清后抗dsDNA可与标记dsDNA结合,经50%饱和度硫酸铵盐析。将结合抗dsDNA的标记抗原与未结合的标记抗原分开(前者在沉淀中,后者在上清液中),再用γ计数仪分别测定放射性,计算出抗dsDNA结合率。并据此判定抗dsDNA的有无。
    (3)酶联免疫吸附试验(ELISA):基本原理是将dsDNA包被于聚苯乙烯等固相载体微孔中,依次加入待测血清、酶标记抗人IgG或酶标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)、酶底物呈色。每种反应物加入后在一定温度下温育30~60min,彻底清洗后再加下一反应物。呈色程度可用酶联检测仪测定吸光度(A)反映,并据此判定检样中有无抗dsDNA。此法的关键之处是dsDNA很难包被于固相载体上,必须将微孔反应板用鱼精蛋白、多聚赖氨酸、戊二醛等做预处理。
    (4)滴金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay,DIG-FA):此法原理与酶免疫斑点试验大致相似,但以胶体金标记的抗体代替酶标记抗体。预先用亲和素(avidin)或链亲和素(strep-tavidin)包被硝酸纤维素(NC)膜,再将生物素化的dsDNA结合于其上,将此NC膜固定于渗滤盒中央的圆孔处,其下以吸水填料充实。检测时依次滴加待检血清(如含抗dsDNA,则可与NC膜上dsDNA结合)、洗涤液、金标记SPA、洗液,可在1~2min内完成全部操作。抗dsDNA阳性时,NC膜上包被dsDNA处可出现红色圆点。
  • +试剂
    试剂:
    同IIF法、EIS法、DIG-FA法。
  • +操作方法
    操作方法:
    同IIF法、EIS法、DIG-FA法。
  • +正常值
    正常值:
    健康人血清1∶10稀释为阴性(绿蝇短膜虫法)。
    健康人结合率≤20%(放射免疫分析法Farr试验)。
    一般以待测血清A值/阴性对照A值(P/N)≥2.1为阳性,正常人P/N值<2.1(ELISA法)。
    正常人为阴性(NC膜上不出现着色点)(滴金免疫渗滤试验)。
  • +临床意义
    临床意义:
    抗dsDNA自身抗体是SLE的最重要的自身抗体,检出率40%~70%。高滴度抗dsDNA的存在是SLE诊断的重要依据,也是疾病活动性特别是肾脏损伤的标志。除用于SLE的诊断外,也可用于临床病程和治疗效果的监测,对判断预后也有一定价值。但也有人报道在肝脏疾病、青少年型类风湿性关节炎,乃至正常人中发现低滴度抗dsDNA。
  • +附注
    附注:
    上述几种检测技术的特异性都不是100%的。例如,绿蝇短膜虫动基体中虽不含ssDNA,但可能含少量组蛋白,放免法、ELISA法、滴金渗滤法等用作抗原的dsDNA,也常常含有ssDNA,而即使污染的ssDNA不足1%,引起的假阳性即可高达6%。因此,对抗dsDNA的检测结果应结合临床分析,必要时应动态观察。此外,鉴于检测试剂中DNA抗原的来源不同,碱基组成和顺序可能有一定差异,使抗体结合的表位发生变化。
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