原理:

胰岛素原(proinsulin,PI)胰岛素原是胰岛素在体内的贮存形式,测定胰岛素原有利于判断血浆胰岛素水平。胰岛素原由86个氨基酸残基组成,分子量为9000,胰岛素原的生物学活性相当低,约为胰岛素的10%。通常仅有少量的胰岛素原进入血液循环。因为肝脏清除胰岛素原的能力仅为清除胰岛素能力的25%,所以胰岛素原的半寿期比胰岛素长2～3倍,并在禁食后其血浆浓度可达胰岛素血浆浓度的10%～15%。将一定量的标记胰岛素、抗胰岛素抗体和各种已知量的胰岛素标准品或血浆样品相混合，使之发生特异性结合。然后用葡聚糖炭粉分离游离胰岛素和结合的胰岛素，测定葡聚糖炭粉的放射性。葡聚糖炭粉吸附的放射性随标本中胰岛素含量增加而增加。

操作方法:

(1)胰岛素碘标记物制备和纯化：

①取Na¹²⁵I 3.7×10⁷Bq置于含胰岛素2μg(20μl)的反应管内。

②加氯胺T溶液10μl。

③立即盖紧，轻敲小管使试剂快速混和。

④12～15s后，加偏焦亚硫酸钠溶液25μl(62.5μg)。

⑤把管内容物加至Sephadex G-50柱上，用测定缓冲液洗涤，每管0.5ml收集45管，再用γ计数器计数。第一峰为¹²⁵I标记的活性胰岛素，第二峰是没有结合的放射性碘。

(2)标记激素的免疫反应性估价：取第一峰收集物，以测定缓冲液稀释至5000cpm/0.1ml，取0.1ml该标记物于小试管中，加入过量抗血清(0.1ml)及0.1ml测定缓冲液，在4℃温育24h，然后加1ml葡聚糖活性炭悬浮液，在适当搅拌后，试管在4℃静止15min，然后再离心15min，丢弃上清液，计数沉淀，沉淀计数应少于加入量的5%，如计数增加，指示¹²⁵I-胰岛素破坏。

(3)抗血清滴定：将抗血清系列稀释，从1∶320000至1∶10 000测定时，在小试管中加0.1ml测定缓冲液，0.1ml稀释的抗血清，0.1ml稀释的标记胰岛素。在4℃温育20h，然后加1ml葡聚糖活性炭，适当搅拌后，在4℃温育15min后，再离心15min。丢弃上清液，测量沉淀物放射性计数，计数以加入量(F/T%)的35%～60%为合适的抗体稀释度。

(4)胰岛素测定：标准管与测定管做双份，具体操作如下表(表1)：

临床意义:

升高常见于:①胰腺β细胞肿瘤,大多数β细胞瘤患者都有胰岛素、C肽和胰岛素原浓度的增加;部分患者只有胰岛素原升高;②罕见的家族性高胰岛素原血症,其原因是胰岛素转化为胰岛素的能力减弱;③2型糖尿病患者,胰岛素原比例和胰岛素原转化中间体都会增加,并且与心血管危险因子关联;④妊娠期糖尿病有明显高浓度的胰岛素原和分裂的32、33胰岛素原;⑤在慢性肾衰竭、肝硬化和甲状腺功能亢进患者也可见胰岛素原浓度增加。