原理:

(1)ELISA法：样品中的Mb和酶标Mb与Mb抗体竞争结合，酶标Mb-Mb抗体复合物中的辣根过氧化物酶作用于底物(OPD-H₂O₂)产生有色物质，颜色深浅与样品中Mb浓度成反比，查半对数坐标曲线即得样品Mb浓度。

(2)RIA法：血清中的Mb和¹²⁵Ⅰ-Mb在缓冲液中共同竞争性的与抗体结合。加入PR分离剂，¹²⁵Ⅰ-Mb-抗体复合物和抗兔IgG结合而沉淀，经离心分离，测沉淀物的放射性，计算各标准浓度点的B/B₀%。从标准曲线上可得出血清中Mb浓度。

操作方法:

荧光免疫测定法、化学发光及电化学发光法等。

(1)ELISA法：取一清洁干燥聚丙乙烯微孔反应板，标明空白、标准和测定，按以下步骤进行：

①空白对照孔加入200μl%正常兔血清，其余孔各加入200μl包被液(内含Mb抗体)，37℃放置30min，再置4℃过夜，弃去上层液，用洗涤液洗3次，每次放室温3min。

②空白对照孔加入100μl14%正常人血清；标准孔各加入5、10、20、40、80、160、320ng/ml的标准Mb溶液(用稀释液配成)20μl，再加入4%正常人血清，测定孔加入20μl样品血清，再加入4%正常人血清8μl。每孔各加入100μl酶标Mb溶液，置37℃1h，弃去溶液，用洗涤液洗3次。

③每孔各加入200μl底物溶液，37℃15min(避光显色)。

④每孔加入2mol/L H₂SO₄以终止反应，振荡1min，放置室温10min，以空白对照孔调零，在492nm处读取各孔吸光度。

(2)RIA法：

①取10×75mm塑料试管，零标准管加20g/L BSA液0.1ml，标准管(S_1～4)加标准液0.1ml，测定管加待测血清0.1ml。每管各加抗血清0.1ml，混合后放37℃，水浴中20min。

②每管各加¹²⁵Ⅰ-Mb液0.1ml，混合，放37℃水浴中20min，再向各管加PR试剂0.5ml，继续放37℃水浴中30min。

③离心(3500r/min)15min。弃去上清液，在自动γ免疫计数器上测放射性。

④以B/B₀%为纵坐标，相对应的标准Mb浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品管的B/B₀%，从标准曲线上查得样品中Mb浓度。

临床意义:

Mb升高见于:

(1)急性心肌梗死:AMI发病后3小时内Mb开始升高,6小时内阳性75%,6～12小时达峰值,12～24小时阳性59%,18～30小时恢复到正常水平,其诊断AMI的灵敏度为50%～59%,特异性为77%～95%(见表8-2,图8-2)。由于AMI时Mb升高早于其他心肌标志物,故可用于AMI早期诊断和再梗死的发现,但其特异性较差。急性胸痛发作6～10小时Mb阴性可除外AMI。

Tab.8-2 Cardiac marker of serum in AMI

Fig.8-2 The time course about rising of serum heart marker in AMI

(2)肌红蛋白尿症:主要见于遗传性肌红蛋白尿症(可伴有皮肌炎、肌营养不良、多发性肌炎)、挤压综合征和某些病理性肌肉组织变性、炎症等。

(3)其他:急性骨骼肌损伤(挤压综合征)、肾衰竭、心功能衰竭和某些肌病。