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  • -分类名称
    一级分类:血液生化检查;二级分类:蛋白质测定
  • -英文名称
    troponin,Tn
  • -别名
    血清TnI和TnT
  • -概述
    概述:
    肌钙蛋白是存在于骨骼肌和心肌细胞中的一组收缩蛋白。心肌肌钙蛋白(cardiactroponin,cTn)是肌钙蛋白复合体中与心肌收缩功能有关的一组蛋白,由肌钙蛋白T(TnT,是调节蛋白的部分)、肌钙蛋白I(TnI,含抑制因子,在骨骼肌中无表达)和肌钙蛋白C(TnC,与钙结合的蛋白)三种亚单位组成,它们均由不同基因所编码。TnT和TnI是心肌特有的抗原,当心肌损伤或坏死时,可因心肌细胞通透性增加和(或)cTn从心肌纤维上降解下来而导致血清cTn增高。因此,血清cTn浓度变化对诊断心肌缺血损伤的严重程度有重要价值,可利用抗cTnT和cTnI的特异抗血清进行测定。
  • +原理
    原理:
    (1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:应用免疫层析方法测定样品中的特异抗原(CTnT、CTnI)。测试时滴加血清样品于样品槽,样品通过毛细管效应沿试纸膜运动,如果样品中含有特异抗原,试验部位就出现色带,在对照区域内应该有另一颜色条带作为实验对照。
    (2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:生物素与亲和素作用下的双抗体夹心ELISA,用链霉亲和素-生物素化的抗TnT单克隆抗体作包被物,依次于样品中TnT抗原和酶标TnT单克隆的抗体反应,然后加入底物色原。酶催化底物显色,由系列TnT标准制定的标准曲线,定量测定CTnT含量。
  • +试剂
    试剂:
    (1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:CTnT免疫层析试纸条(德国宝灵曼公司专利)。
    CTnI免疫层析试纸条(进口)。
    (2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
    ①生物素-亲和素CTnT单克隆抗体包被板。
    ②孵育缓冲液。
    ③浓缩洗涤液。
    ④酶标结合物。
    ⑤CTnT标准品。
    ⑥底物色原:ABTS(二氨2,2叠氮)。
  • +操作方法
    操作方法:
    放射免疫法或化学发光法。
    (1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:
    ①将包装纸打开,标记上样品编号。
    ②加5~6滴血清样品到样品槽中。
    ③在10~15min内观察色带出现情况。
    (2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
    ①在包被板中分别加入标准血清,对照血清和病人标本于相应的孔内各50μl。
    ②每孔各加孵育缓冲液50μl,并轻轻混匀。
    ③室温下孵育60min后洗涤三次,10min内完成。在吸水纸上用力拍打微孔。以除去残留水滴。
    ④每孔各加入酶结合物100μl,轻轻混匀。
    ⑤倒空微孔板中的孵育液,用洗涤液将微孔洗三次,在吸水纸上用力拍打微孔,以除去残留水滴。
    ⑥将200μl色原底物溶液加入相应的孔中,避光,轻轻混匀,静置30min。
    ⑦用酶标仪在10min内,于405nm和630nm双波长下测定吸光度值(OD值)。
  • +正常值
    正常值:
    cTnT<0.1μg/L为正常,>0.2μg/L为诊断临界值,>0.5μg/L可诊断急性心肌梗死;cTnI<0.2μg/L为正常,>1.5μg/L为诊断临界值。
  • +临床意义
    临床意义:
    肌钙蛋白(cTnT、cTnI)作为心肌损伤的标志物,对急性心肌梗死(acutemyocardial infarction,AMI)、不稳定型心绞痛、围手术期心肌损伤、急性心肌炎等疾病的诊断、病情监测、疗效观察及预后评估,都具有较高的价值,其灵敏性和特异性均高于心肌酶,尤其对微小的、小灶性心肌梗死的诊断更有价值。
    AMI时,血清cTnT、cTnI开始升高时间为3~6小时,达峰值时间为10~24小时,恢复正常的时间分别为10~15天和5~7天,升高倍数分别为30~40倍和20~50倍,其诊断AMI的灵敏度分别为50%~59%和6%~44%,特异性分别为74%~96%和93~99%(见表8-2,图8-2)。由 于肌钙蛋白升高在心肌梗死时的窗口期较长(cTnT10~15天、cTnI5~7天),不易诊断即时发生的再梗死,但对监测溶栓治疗和诊断胸痛发生后1~2周内的亚急性心肌梗死和隐匿性心肌梗死有一定意义。
    Tab.8-2 Cardiac marker of serum in AMI
    Start increases time (h)Peak time(h)Return normal time(h)Sensitivity (%)Specificity(%)
    cTnT3~610~2410~15d50~5974~96
    CK4~1012~3672~96--
    CK-MB3~612~2448~7217~6292~100
    FABP0.5~3.0-12~2478-
    Fig.8-2 The time course about rising of serum heart marker in AMI
    不稳定性心绞痛时肌钙蛋白常升高,提示有小范围心肌梗死的可能。但骨骼肌疾病和肾衰竭时cTnT也可能升高,故cTnT升高时要注意排除非AMI的升高。
  • +附注
    附注:
    (1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:
    ①试纸条只能用1次,重复使用无效。
    ②试纸条试验区和对照区均不出现色带,取另一试纸条重复检测仍无结果,则表示试纸条失效。
    ③免疫层析技术测定CTnT、CTnI适合床边快速试验,但只是定性或半定量,要真正了解病情严重程度及选择治疗措施还需定量测定。
    (2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
    ①CTnT待测标本最好用血清,不要用抗凝血浆,因为抗凝剂如:肝素、EDTA等对CTnT有影响。
    ②由于CTnT是心肌细胞损伤释放出来的,所以尽量避免标本溶血,如果标本溶血很可能造成检测结果增高。
    ③配制好孵育液不要冷冻保存,应放在2~8℃冷藏。
    ④实验前应注意试剂有无失效,如变质,其颜色加深。
    ⑤为了提高CTnT检测的可靠性,应注意加样的准确及其他操作过程,比色最好选用双波长。
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