您现在的位置：首页>血清蛋白电泳
-
+全部展开 -全部收缩
- -分类名称
一级分类:血液生化检查;二级分类:蛋白质测定
- -英文名称
serum protein electrophoresis,SPE
- -别名
- -概述
概述:蛋白质等生物分子在缓冲液中带负电荷或正电荷，在电场中向阳极或阴极运动，称为电泳(electmphomsis)。由于其等电点不同，分子大小、形状和荷质比的不同，使不同蛋白质分子具有不同的电泳迁移率，在一定的支持介质中可借以分离各种蛋白质。常用的电泳技术有：醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳等。血清蛋白电泳以醋酸纤维素薄膜应用最为普遍。
- +原理
原理:血清蛋白是由多种蛋白质组成,通过SPE可对血清蛋白的各种组分做定性及定量分析。SPE时从阳极开始至少可分出五个区带:清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。正常血清蛋白电泳扫描图形及其详细组分位置见表9-2、图9-1和图9-2。Tab.9-2 Electrophoresis area distribution of serum protein element
Prealbumin Albumin α1globulin α2globulin β globulin γ globulin prealbumin albumin α1-lipoprotein α2-macroglobulin transferrin immunoglobulin 
Fig.9-1 Normal serum protein electrophoresis pattern
Fig.9-2 Electrophoresis area distribution of serum protein element- +试剂
试剂:(1)巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6±0.1、μ＝0.06)：以巴比妥2.21g、巴比妥钠12.36g于500ml蒸馏水中，加热溶解，待冷却至室温后加蒸馏水至1000ml。(2)染色液：①丽春红S染色液：丽春红9.04g、三氯醋酸6g，用蒸馏水溶解，并稀释至100ml。②氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.1g，溶于无水乙醇20ml中，加冰醋酸5ml甘油0.5ml使溶解。然后将磺柳酸2.5 g，溶于少量蒸馏水中，加入前液，再以蒸馏水补足至100ml。(3)漂洗液：①30ml/L醋酸溶液：用于丽春红染色的漂洗。②甲醇45ml，冰醋酸5ml和蒸馏水50ml混匀。用于氨基黑10B染色的漂洗。(4)透明液：柠檬酸(C6H5Na3O7·2H2O)21g和N-甲基-吡咯烷酮150g，用蒸馏水溶解，并稀释到500ml。亦可选用氢萘或液体石蜡透明。(5)0.4mol/L氢氧化钠溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液。- +操作方法
操作方法:分析方法很多,临床常用醋酸纤维素薄膜法和琼脂糖凝胶法。(1)将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其处于同一平面。(2)醋酸纤维素薄膜的准备：取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线，做点样标记。编号，并标明正、负极后，将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡，待充分浸透后(一般为20min)取出，夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。(3)将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样，样品应与薄膜的边缘保持一定的距离，以免电泳图谱中的蛋白区带变形，待血清渗入薄膜后，反转薄膜，使光面朝上，平直地贴于电泳槽支架上，用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通，稍待片刻。(4)接通电源，注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极，切勿接错。电压90～150v，电流0.4～0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压，电流可能不同，应灵活掌握)，夏季通电45min，冬季通电时间稍长，约为60min，电泳区带展开约25～35mm即可。(5)染色：通电完毕，取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min(以白蛋白区带染透为止)，然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景无色为止。(6)定量：①比色法：将漂洗的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2)，其余各管加3ml，振摇数次，置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度，然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠，加入量同上法。10min后，白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2)，其余各管加0.3ml，以中和部分氢氧化钠，使色泽加深，必要时离心，取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照)，然后计算各自的含量。②光密度计扫描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果)，将薄膜浸入透明液中2～3min，然后取出，以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡)，将此玻片竖立片刻，除去多余透明液后，置于恒温90℃至100℃的烘箱内，烘烤10～15min，取出冷却至室温，用此法透明的各蛋白区带鲜明，薄膜平整，可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明，应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易发生皱折)。B.扫描定量：将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内，进行扫描分析。- +正常值
正常值:最好用各组分蛋白百分率或实际浓度(绝对值)两种方式同时报告。各实验室应根据自己的实验条件建立参考区间。表9-3列出的参考区间引自《全国临床检验操作规程》第4版(醋酸纤维素薄膜法,丽春红S染色)。Tab.9-3 Typical serum protein electrophoresis reference patternZone g/L Percentage of Total Protein Zone g/L Percentage of Total Protein Albumin 35～52 0.57～0.68 β 5.0～10.0 0.07～0.13 - +临床意义
临床意义:1.临床常见病理的电泳图形 见图9-3及表9-4。
Fig.9-3 Pathologycal electrophoresis pattern of serum proteinTab.9-4 Clinical commmon pathologycal electrophoresis pattern of serum proteinDisease A α1 α2 β γ hypeprotemia ↓↓ N,↑ N,↓ ↓ ↓,N hyperlipidemia N ↑ ↑ ↑ N malignant tumor ↓ ↑ ↑ (1)肝病型:表现为白蛋白减低,α1、α2、和β球蛋白有减少倾向(高血脂时β球蛋白亦可增高),球蛋白增高。见于慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌(常合并肝硬化)。(2)M蛋白血症型:表现为白蛋白轻度减低,单克隆γ球蛋白(亦有β球蛋)明显增高,偶有α球蛋白增高;在γ区带、β区带或β与γ区带之间出现致密浓集、峰型明显的M蛋白区带。见于多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等。(3)肾病型:表现为白蛋白及γ球蛋白减低,α2及β球蛋白增高。见于肾病综合征和糖尿病肾病时。(4)其他型:各种急、慢性炎症和应激反应时表现为α1、α2、β三种球蛋白均增高的炎症型;结缔组织病常伴有γ球蛋白增高;先天性低(或无)γ球蛋白血症时γ球蛋白减低(或消失);蛋白丢失性肠病表现为白蛋白及γ球蛋白减低,α2球蛋白增高。临床常见的几种疾病血清蛋白电泳图形变化,见图9-3及表9-4。2.单凭SPE不能确立诊断,但出现异常SPE图形时结合蛋白代谢紊乱和临床表现,可以对某些疾病或疾病组进行分类和评估其活动状况等。3.SPE标本 必须用血清而不能用血浆(否则纤维蛋白原在β球蛋白区出现额外区带)。- +附注
附注:(1)每次电泳时应交换电极，可使两侧电泳槽内缓冲液的正、负离子相互交换，从而使缓冲液保持在一定的pH水平，然而，每次电泳时薄膜数量不同，故缓冲液在使用10次后，最好弃去，重新配制，否则影响电泳效果。(2)电泳槽内缓冲液高度保持一定，过低会出γ球蛋白的电渗现象(向阴极移动)。同时，电泳槽两侧液面应保持水平一致，否则通过薄膜时有虹吸现象，将会影响蛋白质分子的泳动速度。(3)电泳失败的原因：①电泳图谱不整齐：常见于点样不均匀，位置不佳，薄膜尚未干燥或水分蒸发，缓冲液变质，电泳时薄膜位置放置不正确，使电流方向不平行等。②蛋白组分分离不佳：如点样过多，电流过低，薄膜结构过分细致，透水性差，导电差等。③白蛋白结果偏低：见于染色时间不足，染色液陈旧，不透明直接扫描等。④薄膜透明不完全：见于温度未达到90℃以上将标本放入烘箱，透明液时间过长或薄膜的浸泡时间不足等。⑤透明膜上有气泡：见于玻璃片不干净(油脂、污垢等)使薄膜部分与其脱开，贴膜时操作不慎将气泡裹入等。(4)点加样本时，一定要注意薄膜的毛面和光面，将样本点在毛面上。(5)放置薄膜时，要注意其正、负极，切勿接错。 - +试剂
