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  • -分类名称
    一级分类:血液生化检查;二级分类:血液无机物测定
  • -英文名称
    serum calcium
  • -别名
  • -概述
    概述:
    钙是人体内含量最多的阳离子。原子式为Ca,原子量为40.08。正常成人含钙25~30mol,其中99%以上存在于骨骼及牙齿,骨骼是体内最大的储钙库,细胞外液含钙只有27mmol左右,含量虽少但在维持正常的神经肌肉应激性,腺体分泌以及一些酶系统的活性特别是在血凝过程中起着重要作用。细胞内液几乎不含钙。
    血液中的钙绝大部分存在于血浆中,血浆钙有非扩散性钙及扩散性钙两部分。非扩散性钙与蛋白质结合(大约1g蛋白质结合0.87mg的钙),约占血浆总钙的40%~50%,扩散性钙主要为离子钙(Ca2),还有小部分的钙盐(如柠檬酸钙,其他有机酸钙盐及碳酸氢钙等)。非扩散性钙与扩散性钙之间受H浓度和HCO3浓度的影响,在生理状态下保持平衡,可用下式表示。
  • +原理
    原理:
    (1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB):血清中的钙离子在碱性溶液中与甲基百里香酚蓝(MTB)结合,生成一种蓝色的络合物。加入适量8-羟基喹啉,可消除镁离子对测定的干扰,与同样处理的钙标准液进行比较,求得血清总钙含量。
    (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法:邻甲酚酞络合酮(OCPC)是金属络合染料,也是酸碱指示剂,在pH11.0溶液中与钙及镁螯合,生成紫红色螯合物。作钙测定时,在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。与同样处理的钙标准液比色,可求得血清钙含量。
    (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法:标本中钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合成为可溶性复合物,使溶液成淡红色。乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)对钙离子的亲和力很大,能与该复合物中的钙离子络合,指示剂重新游离而使溶液呈现蓝色。所以在滴定钙时,加入钙红为淡红色,用ED-TA-Na2滴定转变为蓝色时,为滴定终点。与同样处理的钙标准液滴定,计算出标本中的钙的含量。
    (4)离子钙测定:离子选择电极是一种化学传感器,它能将溶液中某种特定离子的活度转变成电位信号,然后通过仪器来测量。电极电位随溶液中离子活度变化的关系服从Nernst方程。
    选择电极的电位(E)与溶液中被测离子活度的对数成线性关系。
    血液抽出后,溶解于其中的CO2气体会释放到空气中,使血液pH值变碱性,而血液pH值则与离子钙浓度之间成负相关的关系,pH值增加0.1,离子钙浓度约降低4%~5%。所以新型的离子型的离子钙分析仪都是在测定血清离子钙浓度的同时,测量血清pH值,再计算出pH7.4时的标准化离子钙(nCa2)浓度。
    离子浓度分析仪通常采用比较法来测定样品溶液中离子钙和pH值,即先测量二个已知浓度标准液中的离子钙和pH的电极电位,在仪器程序内建立一条斜率曲线,然后测量样品溶液中离子钙和pH的电极电位,从已建立的斜率曲线上求出样品溶液中离子钙浓度和pH值,并计算出标准化离子钙浓度,直接在仪器上显示出结果或打印出分析报告。
  • +试剂
    试剂:
    (1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB):
    ①MFB试剂:取去离子水20ml,加浓盐酸1.2ml,再加8-羟基喹啉1.45g溶解。另取去离子水500ml,加甲基百里香酚蓝络合剂0.114g使溶,再加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1.5g溶解,混合两液,加16.75g/L乙二胺四乙酸二钠水溶液2.2~2.4ml混匀,加去离子水至1L。
    ②显色基础液:取去离子水700ml加无水亚硫酸钠24g溶解,加单乙醇胺200ml混匀,用去离子水稀释至1L。
    ③钙标准液(2.5mmol/L):精称恒重的碳酸钙(CaCo3,AR)0.25g,加稀盐酸(1份浓盐酸加9份去离子水)7ml溶解后,加去离子水900ml,然后用500g/L醋酸铵溶液调pH至7.0,移入1L容量瓶中,再用去离子水稀释至刻度,混匀。
    (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法:
    ①邻甲酚酞络合酮显色剂:称取8-羟基喹啉0.5g,置烧杯中,加浓盐酸5ml,使其溶解并转入500ml容量瓶中,再加入邻甲酚酞络合酮25mg,待完全溶解后,加Triton X-1001ml,混匀,然后加去离子水至刻度。置聚乙烯瓶内保存。
    ②1mol/LAMP碱性缓冲液:称取2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)89.14g,加500ml去离子水溶解后移入1L容量瓶中,再用去离子水稀释至刻度,置聚乙烯瓶中室温保存。
    ③显色应用液:应用时根据标本的多少将上述两液等量混合。
    ④钙标准液(2.5mmol/L)见MTB法。
    ⑤5g/L EGTA溶液:称取乙二醇二乙醚二胺四乙酸盐(EGTA)0.5g于100ml去离子水中,此试剂用于测定混浊标本。
    (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法:
    ①0.2mol/L的氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠8g,用去离子水溶解并稀释至1L。
    ②钙红指示剂:称取钙羧酸钠[化学名2-羟基-1-(2-羟基-4-磺基-1-萘基偶氮)-3-萘甲酸钠]0.1g,溶于甲醇20ml中,置棕色瓶中保存。
    ③乙二胺四乙酸二钠溶液:称取ED-TA-Na20.1g,加去离子水50ml,加1mol/L氢氧化钠2ml,待完全溶解,加去离子水至100ml。
    ④钙标准液(2.5mmol/L):配法同MTB法。
    (4)离子钙测定:各厂家生产的仪器所需试剂都是配套供应的,其配方未完全公开。
  • +操作方法
    操作方法:
    (1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB):
    按表1操作。
    混匀,静置5min后,用波长610nm或红色滤光板,光径1.0cm比色,以空白管调吸光度至0点,分别读取各管吸光度。
    (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法:
    按表2操作。
    混匀,5min后用波长575nm或红色滤光板,光径1.0cm比色,以空白管调吸光度至0点,分别读取各管吸光度。
    如果标本混浊,黄疸或溶血,需作校正试验,即:于空白管及测定管中各加入5g/LEGTA溶液0.05ml,再测吸光度,两次读取的吸光度差,即为校正吸光度。
    (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法:
    按表3操作。
    混匀,管内液体呈淡红色,迅速用乙二胺四乙酸二钠溶液滴定至溶液呈淡蓝色为终点,记录各管EDTA-Na2用量(ml)。
    (4)离子钙测定:商品的离子钙分析仪所用的钙电极都采用中性载体作钙电极的活性材料制成聚氯乙烯(PVC)电极膜,电极的寿命约半年左右:pH电极由特殊玻璃毛细管制成;参考电极采用银/氯化银制成。
    各种型号的离子钙分析仪的试剂配方、试剂用量、操作方法有所不同,一般要进行下列步骤。本法以一种国产的离子钙分析仪为例。
    ①接上电源,仪器首先进行显示及电子线路检测,结束后即可进行二点斜率定标。
    ②斜率定标时,推出吸样针先后将其浸入盛有低、高二个浓度斜率定标仪的小瓶中,吸取斜率定标液,待仪器发出“嘟”声后移去。吸样针推回原处,仪器自动进行斜率定标。
    ③定标通过后,可进行样品测量。
    A.毛细血管血测量:将毛细管血混匀,推出吸样针,取掉两端塞子,一头装上接头,将接头另一端装在取样针上,按“测量”键至样品完全充满样品测量腔后,再松开“测量”键,进样泵即停止工作。此时应检查样品测量腔内的样品是否有气泡,如有气泡存在,应在松开“测量”键8s内,再按“测量”键,继续吸取样品,直至排除气泡为止。移去样品,擦净吸样针并推回原位,在进样结束8s后即显示测量数据并打印结果。
    B.血清测量过程同全血测量。
    ④标本测量结束,仪器冲洗管路和样品测量,冲洗好后即可进行下一个样品的测量。
    ⑤在最后一次定标或血样测量结束后10min不操作仪器,仪器将进入“休眠”状态。此时如需进行血样测定,必须先进行一点定标。若没有血样测定,仪器每隔30min自动进行一次一点定标。
  • +正常值
    正常值:
    (1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB):
    ①血清钙:成人2.03~2.54mmol/L
    儿童2.25~2.67mmol/L
    ②血清离子钙:1.13~1.35mmol/L
    ③红细胞钙:全血中的钙几乎都在血浆中,红细胞中只有15.72μmol/L压积细胞。
    ④尿钙排泄量:随饮食不同而有较大幅度的变化:
    A.低钙饮食时<3.75mmol/24h;
    B.一般钙饮食时<6.25mmol/24h;
    C.高钙饮食时可达<10mmol/24h。
    ⑤唾液钙:0.74~1.69mmol/L。
    (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法:见(MTB)法。
    (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法:见(MTB)法。
    (4)离子钙测定:血清离子钙 成人为1.10~1.34mmol/L。
  • +临床意义
    临床意义:
    (1)乙二胺四乙酸二钠滴定法:
    ①血钙增高:
    A.甲状腺功能亢进症:有原发性和继发性两种。继发于佝偻病、软骨病和慢性肾功能衰竭。血钙增高大于2.6mmol/L,最高可达4.5mmol/L,同时血磷降低,小于1.13mmol/L,最低可达0.64mmol/L。尿钙增高,男性大于9.68mmol/24h,女性大于8.07mmol/24h。
    B.维生素D过多症:血清钙、磷均可增多,钙质沉积于肾脏可发展成肾脏钙化病。
    C.多发性骨髓瘤血钙增高:常因球蛋白增高,同钙结合增高。
    D.肿瘤广泛骨转移:血钙中度增多,但磷正常或略高,尿钙排泄增多,尿中羟脯氨酸排泄增多,反映骨质胶原的分解。
    E.阿狄森病。
    F.结节病:由于肠道过量吸收钙,而使血钙增高,血磷略高。
    ②血钙降低:血钙减低可引起神经肌肉应激性增强而使手足搐搦,可见于下列疾病:
    A.甲状旁腺功能减退:甲状腺手术摘除时以及甲状旁腺而引起功能减退,血清钙可下降到1.25~1.50mmol/L,血清磷可增高到1.62~2.42mmol/L,假性甲状旁腺功能减退并非缺乏甲状旁腺激素,而肾脏中缺乏对甲状旁腺激素起反应的腺苷酸环化酶,故引起血清钙降低。
    B.慢性肾炎尿毒症:肾小管中维生素D3-1羟化酶不足,活性维生素D3不足,使血清总钙下降,由于血浆白蛋白减低使结合钙减低,但代谢性酸中毒而使离子钙增高,所以不易发生手足搐搦。
    C.佝偻病与软骨病:体内缺乏维生素D,使钙吸收障碍,血清钙、磷均偏低。
    D.吸收不良性低血钙:在严重乳糜泻时,因为饮食中的钙与不吸收的脂肪酸生成钙皂而排出。
    E.大量输入柠檬酸盐抗凝血后:可引起低血钙的手足搐搦。
    (2)离子钙测定:
    ①离子钙的测定对较大的外科手术是最重要的,如心脏手术、移植及其他需大量输入柠檬酸盐的抗凝血的手术或术后脓毒血症、肾、心肺衰竭的病人,或烧伤病人,因这些状态下血清蛋白的水平已经减少,出现酸碱失衡和输入柠檬酸盐血液制品,反复测定总钙已经没什么意义。如果要补充钙,离子钙测定对于这些病人的正确治疗是最好的指南。
    ②当怀疑有新生儿低钙血症时,应测定离子钙,如果继续出现并发症,更应该经常测定。
    ③肾脏疾病在肾移植后,或进行血液透析的病人,钙代谢经常改变而且有时很激烈。因此在做血透时维持轻微的血钙平衡对保持良好的心脏功能是重要的。而离子钙的测定是对此监测的最好手段,肾病综合征以血清蛋白减少为特征,总钙和离子钙水平均下降。以蛋白水平纠正总钙可能引起过高估计离子钙。
    ④原发性甲状旁腺功能亢进的病人,90%以上的病例离子钙升高,大约80%的病例总钙升高。
    ⑤急性胰腺炎的病人,离子钙在发病后24h内降低,而到48h恢复正常。总钙在48h还轻度降低,这时由于白蛋白也降低之故,持续的离子钙降低与严重的胰腺炎有关。
    ⑥恶性肿瘤病人离子钙增高的百分比大于总钙,也许可用于肿瘤的过筛试验。当高钙血症的原因难于确定时,必须考虑到恶性肿瘤的存在。
  • +附注
    附注:
    1.在以下疾病和状态中测定离子钙的含量更为准确①妊娠妇女、新生儿;②大量输入含有柠檬酸的血液或新鲜冰冻血浆;③异常蛋白血症,例如肾蛋白丢失、吸收不良综合征、多发性骨髓瘤、慢性活动性炎症、术后、需要加强医疗护理的病人;④体内pH改变和蛋白质丢失所致晚期肾病;⑤恶性高钙血症,尤其是当PTH正常时;⑥甲状旁腺功能亢进综合征。
    2.当血浆钙的分布不受体内pH变化影响时,钙离子测定才具有诊断意义。血样本被收集后,血液的pH降低或酸中毒会因血细胞的代谢而导致钙离子升高;血液的pH升高或碱中毒,因样本中的CO2排出而导致钙离子下降。
    3.样本采集与处理必须规范 ①当钙离子浓度稳定时,患者休息至少10分钟并且平躺或静坐至少5分钟;②与最后一次进食的时间间隔至少为4小时;③采血时静脉压迫要轻,因为静脉压迫一段时间可能导致钙总量上升10%;④酸中毒可致血钙离子升高;⑤钙总量测定时推荐使用肝素抗凝血浆,钙离子测定应用肝素化全血或无氧状态下获得的血清,不能使用EDTA和草酸盐抗凝的血浆;⑥尿钙测定需收集24小时尿液;⑦样本的保存:总钙测定9℃保存1周;钙离子测定全血4~8℃保存4小时,血浆在室温下可保存4小时,在无氧条件下,4℃可保存24h。
    4.生理因素对血钙测定有影响作用 ①运动、体位由仰卧位变为直立位,血总钙和离子钙均升高;②进食后不久采样会因为体内pH升高和蛋白质增加而导致钙离子下降5.4%;③过度换气,pH每上升0.1个单位,钙离子下降0.05mmol/L(0.2mg/dl);④生理节奏的变化:一天内不同时间钙离子的数量也不相同,变化范围为4%~10%;⑤大量牛奶等高钙饮食可由于肠道过量吸收引起血钙增高;⑥尿钙的参考区间随饮食变化而变化。
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