原理:

先用乙醇沉淀血清蛋白，再用己烷提取，提取物用正相HPLC进一步纯化，然后用反相HPLC作定量分析，用电化学方法把VitK还原成萘氢醌，用430nm为发射波长和340nm为激发波长测量萘氢醌的荧光。

操作方法:

(1)血清1.0ml与50μl反式-[3H]-叶绿醌3000衰变/min(0.2ng)混合，置室温1h。

(2)加入3ml乙醇并混匀，静置10min后加入9ml己烷，混合。

(3)用1000g离心此悬液。

(4)移出己烷层，然后在氮气中干燥，残余物用250μl己烷溶解。

(5)把己烷提取物(200μl)注入洗脱柱中，并用一个Corasil保护柱保护。用己烷乙腈液洗脱，流速为1.5ml/min，并用254nm检测。先注入标准品来确定含有维生素K的洗脱液的准确体积。

(6)收集含叶绿醌的洗脱部分，然后在氮气中干燥，把剩余物溶解于250μl的100%甲醇中。

(7)把20μl样品加到4ml Aguasol中，用液体闪烁计数器测定放射活性来检测叶绿醌的回收率(65%～75%)。

(8)从上述5～6步得到初步纯化的维生素(200μl)，把此半纯品加到一个Zorbax ODS柱上进行洗脱，洗脱液为乙醇/乙酸钠缓冲液，流速1.0ml/min。

(9)当柱的洗脱液通过ESA监视室时被电化学还原，并由LC-4A电流检测器使电压维持在－0.65V。

(10)当洗脱液通过还原池时用荧光分光光度计测定还原性维生素，其激发波长为340nm，发射波长为430nm。

临床意义:

健康人对VitK的需要量低而膳食中含量比较多，原发性VitK缺乏不常见，临床上能见到的由于VitK缺乏所致的表现是继发性出血如伤口出血，大片皮下出血和中枢神经系统出血等。胎盘转运VitK量少，新生儿初生时体内储存量低及体内肠道的无菌状态阻碍了利用VitK，母乳中VitK含量低，新生儿吸乳量少以及婴儿未成熟的肝脏还不能合成正常数量的凝血因子等原因，使新生儿、小婴儿普遍存在低凝血酶原症。已知最常见的成人VitK缺乏性出血多发生于摄入含VitK低的膳食并服用抗生素的病人中，VitK不足可见于吸收不良综合征和其它胃肠疾病如囊性纤维化、口炎性腹泻、溃疡性结肠炎、节段性小肠炎、短肠综合征、胆道梗阻、胰腺功能不全等，以上情况均需常规补充VitK制剂。即使进食大量富含天然VitK₁的膳食也未发现有产生毒性反应者，但服用超过药理剂量的VitK₂能导致新生儿溶血性贫血、高胆红素血症和肝中毒，在成人则可诱发心脏病和肺病。