原理:

补体结合试验法：抗原抗体复合物可以结合补体，这是补体结合试验的依据。绵羊红细胞和其相应抗体(溶血素)的复合物结合补体后出现溶血现象。因此，绵羊红细胞和溶血素被作为补体结合试验中判断待测系统中有无抗原抗体反应的复合物系统。如待测系统产生抗原抗体复合物，则可结合一定量补体，此时加入溶血系统则不出现溶血。如待测系统中只有抗原或抗体，不能结合补体，加入溶血系统则与游离补体结合而发生溶血，这就是补体结合试验的基本原理。

操作方法:

(1)补体和溶血素的滴定。

①取补体1ml，加BBS 9ml，依次稀释成1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，1∶60，1∶80，1∶100，1∶200，1∶400，同时取50%的溶血素0.2ml，加BBS 9.8ml，即为1∶100的溶血素，然后继续稀释成1∶800，1∶1600，1∶3200，1∶6400。

②采取方阵排列试管，纵行各管加不同浓度的补体0.1ml，横排各管加溶血素0.1ml(皆应从最高稀释度加起)混匀后，各管加BBS 0.2ml，补体和溶血素对照管各加BBS0.3ml，最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml。各管总量为0.5ml，摇匀，放37℃水箱中30min，观察结果。兹举一例说明(表1)：

以完全溶血的补体和溶血素最高稀释度为各自的单位。上表(表1)中溶血素1∶3200为一个溶血素单位，补体1∶80为一个补体单位。在实际应用时，溶血素用2u(3200÷2＝1600)，补体用2.5u(80÷2.5＝32)。

(2)正式试验：

①用V型微量反应板操作，每份标本作一个试验孔，一个血清对照孔。各孔内先加BBS 0.025ml。

②用稀释棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔，旋转后移入第二孔，共八孔，如此可得1∶2～1∶256稀释。

③按下表(表2))加入各试剂：

(3)结果判断：凡对照组各管的结果应符合以下情况，否则应重做。

补体对照管：2.5u＝0，1u＝0～±，0.5u＝3～4。羊红细胞对照管：4。抗体对照管：0。阴性对照管；1∶2～1∶256＝0。阳性对照管：同一份阳性血清，每次结果应一致。

当各测定管反应最强一管仍为±报告可疑，1～4报告阳性。如测定管和血清对照管均抗补体，全部测定管皆为0，报告阴性。

检查抗体的方法与检查抗原的方法一样，只是改用4个单位已知抗原，藉以测定被检血清。

临床意义:

先用低稀度血清初筛，然后再用病程早期及晚期血清做双倍或4倍稀释以测效价，如呈4～8倍增长者可明确诊断。恙虫病有株间差异，可采用流行株同时检查。