原理:

免疫荧光技术的原理是利用物质吸收光能后，产生激发态而发光的特性。将具有这种特性的荧光素(异硫氰酸荧光黄或罗丹明B200)用化学方法结合在特异的抗体(抗原)的分子上，又不损害其抗体或抗原活性的一种荧光显微镜下的示踪技术。抗体和抗原的结合是高度特异的，所以只要知道其中的一个因子，也就知道了另一个因子。免疫荧光技术就是利用上述两种特性，把不可见的抗原抗体的反应(一抗)与被荧光素标记的抗体(抗抗体)反应，变为肉眼可见的荧光，再根据组织学和细胞学定位来判断特异荧光所在。在荧光显微镜下我们所能见到的亮绿荧光，不是标本本身(无色)发出的，而是荧光物质受到激发后而发出的亮绿荧光。荧光标记抗体技术称荧光抗体技术，荧光标记抗原技术称荧光抗原技术。

操作方法:

(1)抗原(或抗体)基质片(各种组织冰冻切片或培养细胞等)基质片从冰箱取出立即风干。使用前经无水乙醇或丙酮、甲醇等固定剂处理(根据实验要求选择固定剂)。一般固定3～15min，室温晾干。

(2)被检物(血清、脑脊液或其他渗出物等)，根据需要用PBS适当稀释(1∶5或1∶10)滴于抗原基质片上，置室温或37℃温箱反应30min～1h。

(3)0.01mol/L pH7.2 PBS冲洗15min(更换PBS 3次)。

(4)加荧光标记抗体，置室温或37℃温箱30min～1h。

(5)PBS冲洗同(3)。

(6)缓冲甘油(pH7.2)封片，荧光显微镜镜检。

临床意义:

阳性：见于阿米巴肝脓肿、肠阿米巴病或带虫者。