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  • -分类名称
    一级分类:血清学检查;二级分类:补体结合试验
  • -英文名称
  • -别名
    钩端螺旋体补体结合试验
  • -概述
    概述:
    钩端螺旋体病是由各种致病性螺旋体引起的人畜共患的自然疫源性疾病。致病性钩端螺旋体的群和血清型众多,其群特异性的化学组成为类脂多糖复合物,型特异性的化学组成为蛋白多糖复合物,不同型钩端螺旋体的多糖组成有所差异,患者体内可产生相应抗体,检查特异性抗体有助于本病的诊断。
  • +原理
    原理:
    钩端螺旋体抗原与相应特异性抗体结合后,再加荧光素标记的抗人球蛋白抗体,在荧光显微镜下发出荧光。根据是否出现荧光,可知受检血清中有无钩端螺旋体特异性抗体存在。
  • +试剂
    试剂:
    (1)荧光素标记抗人IgG。
    (2)钩端螺旋体抗原。可用4~5个血清型的钩端螺旋体培养物等量混合。
    (3)钩端螺旋体抗原片制备。将钩端螺旋体抗原用接种环取少量,涂于薄而清洁的载玻片上,每张玻片涂2排16点,自然干燥后,在室温中用丙酮固定5min备用。
  • +操作方法
    操作方法:
    (1)用磷酸盐缓冲盐水(pH值7.2)将经56℃灭活30min的受检血清倍比稀释成1∶50~1∶400,共4个稀释度。
    (2)将各稀释度的受检血清分别滴加在抗原涂片的各点上,每张涂片可滴4份受检血清。放湿盒内37℃作用30min。
    (3)倾去玻片上残留的血清。用磷酸盐缓冲盐水(pH值7.2)洗涤。
    (4)加数滴荧光素标记的抗人IgG抗体,放37℃ 30min。
    (5)同法洗涤,待干。加缓冲甘油(pH值9.5)封固,用荧光显微镜检查。
    (6)结果判断:
    (3+)菌体稍膨胀,呈明亮的淡绿色荧光。
    (2+)菌体清晰,呈明亮的淡绿色荧光。
    (+)菌体能分辨清楚,但荧光亮度稍差。
    (±)菌体模糊或形态不典型,亮度差。
    (-)看不到菌体。
    以(+)为判断终点,(±)和(-)判为阴性。
  • +正常值
    正常值:
    阴性。
  • +临床意义
    临床意义:
    结果有助于临床诊断钩端螺旋体病。1∶100或大于1∶100的血清稀释度显示间接荧光抗体染色阳性者,均可判为阳性。如第2次采血测定效价呈4倍以上增长者,临床意义更大。
  • +附注
    附注:
    制作抗原涂片要选用洁净无油的玻片,涂片要薄而均匀。制备好的涂片,待自然干燥后,通过火焰3次,再用丙酮固定,效果较好。
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