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  • -分类名称
    一级分类:血清学检查;二级分类:凝集试验
  • -英文名称
  • -别名
  • -概述
        补体的测定包括测定补体总量、溶血活性、单个补体成份和补体片段量以及补体参与试验等。
  • +原理
        抗原抗体复合物可以结合补体,这是补体结合试验的依据。绵羊红细胞和其
    相应抗体(溶血素)的复合物结合补体后出现溶血现象。因此,绵羊红细胞和溶血素被作为补体结合试验中判断待测系统中有无抗原抗体反应的复合物系统。如待测系统产生抗原抗体复合物,则可结合一定量补体,此时加入溶血系统则不出现溶血。如待测系统中只有抗原或抗体,不能结合补体,加入溶血系统则与游离补体结合而发生溶血,这就是补体结合试验的基本原理。
  • +试剂
        (l)巴比妥缓冲液(BBS):称取氯化钠85.0g,氯化镁六水合物1.68g,氯化钙0.28g,巴比妥5.75g,巴比妥钠2.0g,先将巴比妥加入500ml水中加热溶解后,再加其他成分,补加水至2000ml,此为保留液,用时稀释5倍。
        (2)抗体(溶血素):应无抗补体现象,国内有商品供应。
        (3)2%羊红细胞:用生理盐水离心洗涤后,用BBS配成2%悬液。
        (4)补体:豚鼠血清。
  • +操作方法
        (l)补体和溶血素的滴定:
        ①取补体1ml,加BBS 9ml,依次稀释成1∶20,1∶30,1∶40,1∶50,1∶60,1∶80,1∶100,1∶200,1∶400,同时取50%的溶血素0.2ml,加BBS 9.8ml,即为1∶100的溶血素,然后继续稀释成1∶800,1∶1600,1∶3200,1∶6400。
    ②采取方阵排列试管,纵行各管加不同浓度的补体0.1ml,横排各管加溶血素0.1ml(皆应从最高稀释度加起)混匀后,各管加BBS 0.2ml,补体和溶血素对照管各加BBS 0.3ml,最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml。各管总量为0.5ml,摇匀,放37℃水箱中30min,观察结果。兹举一例说明(表1):
        以完全溶血的补体和溶血素最高稀释度为各自的单位。在实际应用时,溶血素用2U(3200÷2=1600),补体用2.5U(80÷2.5=32)。
        (2)正式试验:
        ①用V型微量反应板操作,每份标本作一个试验孔。一个血清对照孔。各孔内先加BBS 0.025ml。
        ②用稀释棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔,旋转后移入第二孔,共八孔,如此可得1∶2~1∶256稀释。
    ③按表2加入各试剂:
  • +正常值
        0~1∶10
  • +临床意义
        >1∶10为阳性,诊断布氏杆菌病符合率为97.96%。
  • +附注
        操作应仔细准确;玻璃器材必须非常清洁;参与试验的各项已知成分必须预先滴定其效价,配制成规定的浓度使用,才能保证结果可靠。
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